肿瘤微环境空间代谢成像：MALDI-MSI 脑瘤/胰腺癌切片送样协议与基质（9-AA/DHB/CHCA）怎么选

肿瘤微环境（TME）研究里，空间代谢组学正从「锦上添花」变成「必做一环」。脑瘤、胰腺癌这类异质性强的肿瘤，靠匀浆测序会抹平空间差异，而 MALDI-MSI 能在切片上保留代谢物、脂质的原位分布。本文聚焦送样协议和基质选择这两个最容易出错的环节，并说明在哪些情境下免基质源（如新策源 Neo Source INSTRUMENT 的 DESI/PI 源）能绕开基质坑。

送样协议先定三件事

样本状态：冰冻切片是 MALDI-MSI 的主流，厚度通常控制在若干微米级；固定方式、冻存速度直接影响代谢物保留。

切片与转运：避免反复冻融，转运过程防止脱水与污染。

质控：HE 染色相邻切片用于后期区域配准，这一步省了后面补数据很麻烦。

基质怎么选

MALDI 的基质选择基本跟着「想看什么分子」走：

9-AA：偏负离子模式，对脂质、部分代谢物友好，是 TME 脂质图谱的常用选。

DHB：对多肽、一些代谢物较稳，正离子模式常用。

CHCA：蛋白、多肽类大分子更合适。

基质的晶体均匀度、喷覆方式直接决定像素间信号波动。对小分子代谢物，基质自身背景峰是绕不开的干扰源。

免基质源能省掉哪一步

新策源 MSI DPI 采用 DESI/PI 双电离模式，免基质，分辨率 20–200 μm，适配 Agilent、AB SCIEX、Thermo；MSI LDPI 激光/光化学电离，2–3 μm，最小 m/z 70，同样走免基质路线。对以小分子、脂质、药物分布为核心的 TME 研究，免基质意味着没有基质背景、没有喷基质这道工序，信号更干净。若你的核心问题是「代谢物、脂质在哪、梯度如何」，先评估免基质源能否覆盖，往往比反复优化基质喷涂更省力。

决策建议

蛋白、多肽为主：MALDI + CHCA 或 DHB 仍是对的路。

脂质、代谢物为主且怕基质背景：优先免基质 DESI/PI 路线。

兼具高分辨需求：考虑 2–3 μm 的激光免基质源做补充。

主机已有：优先看可加装的模块化源，控制成本。

TME 的空间代谢图像，价值在「异质性」三个字。送样和基质是地基，地基稳了，后面的分布图才可信。把基质背景这一项从方程里拿掉，是很多课题组正在做的选择。